1. تحلل الخلايا وتحلل البروتين
في المرحلة الأولية من استخلاص الحمض النووي البلازميدي، تحتاج الخلايا إلى التحلل لإطلاق الحمض النووي بداخلها. وعادة ما يتم تحقيق هذه العملية باستخدام تركيزات عالية من الأملاح أو المنظفات أو الإنزيمات. وفي هذه العملية، يتمثل الدور الرئيسي لـ Tris في الحفاظ على استقرار درجة حموضة المحلول، وبالتالي حماية الحمض النووي من البيئة الحمضية التي تتشكل أثناء عملية التحلل. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لـ Tris أيضًا المساعدة في عزل الحمض النووي من المحاليل عن طريق الارتباط بالبروتينات وتشويهها.
2. إذابة الحمض النووي واستقراره
بعد تحلل الخلايا، يحتاج DNA البلازميدي إلى التحلل وعزله عن المكونات الخلوية الأخرى. وعادة ما يتم تحقيق هذه العملية باستخدام تركيز عالٍ من الملح أو المنظفات. وفي هذه العملية، يتمثل الدور الرئيسي لـ Tris في توفير قوة أيونية وبيئة درجة حموضة مناسبة لتعزيز إذابة DNA واستقراره. ويمكن لمجموعات الهيدروكسيل والأمين في Tris تكوين روابط هيدروجينية وأيونية مع جزيئات DNA، مما يعمل على تثبيت بنيته ومنع تحلله. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لـ Tris حماية DNA بشكل أكبر من التحلل عن طريق تثبيط نشاط النوكليازات.
3. تنقية الحمض النووي واستعادته
بعد عزل DNA البلازميدي من المحلول، غالبًا ما تكون هناك حاجة إلى سلسلة من خطوات التنقية لإزالة البروتينات المتبقية والحمض النووي الريبي والشوائب الأخرى. تتضمن هذه الخطوات استخلاص الفينول/الكلوروفورم، وترسيب الإيثانول، وما إلى ذلك. في هذه العملية، يتمثل الدور الرئيسي لـ Tris في الحفاظ على درجة حموضة المحلول مستقرة، وبالتالي حماية DNA من البيئة الحمضية أو القلوية التي قد تنشأ أثناء التنقية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن لـ Tris أيضًا المساعدة في استعادة DNA البلازميدي النقي من المحلول عن طريق الارتباط بالشوائب والسماح لها بالترسيب.
